Practica 1-Microrrays
ADN/ARN MICROARRAYS
Objetivo
1.Comprender los conceptos básicos de la técnica de Microrrays.
2.Como se aplica a la genómica funcional.
Componentes:
• Cuatro tiras microarrays QuickStrips™ diferentes (marcadas con 1, 2, 3
y 4 líneas):
Una tira de muestra microarray con una línea: Paciente (#1).
Una tira de muestra microarray con dos líneas: Paciente (#2).
Una tira de muestra microarray con tres líneas: Paciente (#3).
Una tira de muestra microarray con cuatro líneas: Paciente (#4).
• Tarjeta de microarrays.
• Pipeta fija (de 5 µl) o variable.
• Puntas de pipeta.
• Fuente (linterna o transiluminador) de luz U.V. onda larga (luz negro),
para ser compartida por todos los grupos de estudiantes.
Práctica:
REALIZACIÓN DE LA TÉCNICA DE MICRORRAYS.
Como fue una simulación de microarrays, no fue necesario realizar ningún paso de hibridación y lavado. Solo se utiliza una fuente de luz UV de onda larga para detectar la fluorescencia.
Primero obtenemos una tarjeta de microarrays y los cuatro microarray QuickStrips™ individuales con las muestras de ADNc codificados para los pacientes 1, 2, 3 y 4.
Posteriormente, perforamos la lámina protectora que cubre los pocillos, esto lo podemos hacer con la misma punta de pipeta que vamos a usar para pipetear 5 μl y aplicar cada muestra de ADNc en los lugares debidamente identificados para cada paciente en la tarjeta, para cada muestra usamos una punta diferente:
A = Normal. B = Sobre regulado. C = Poco regulado. D = En blanco.
Nosotras en la primera fila tuvimos un fallo y en la D añadimos muestra.
Finalmente colocamos la tarjeta en una incubadora a 37ºC durante cinco minutos para permitir que las muestras se sequen.
Una vez que estén secas visualizamos los resultados de la tarjeta utilizando una linterna o transiluminador UV de onda larga y le echamos foto.
RESULTADOS DEL EXPERIMENTO:
Ⓝ ⇾ expresión normal⊝ ⇾Sin expresión (negro)
(↑) ⇾Expresión elevada (rojo)
(↓) ⇾ Expresión baja (verde)
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